desirable capable to determine phosphate, silicate, and arsenate directly in aqueous 
solution without preliminary stage of dye separation.  

A wide application when using IAs of HPAs in the analysis showed a method 

based on the formation of ion association complex between triphenylmethane dye and 
HPA in conditions, in which the dye is converted to a colorless protonated form [2, 3]. 
In this approach, the dye solution is first acidified to completely form a colorless 
protonated form. Subsequently, the addition of HPA leads to the displacement of the 
proton, because a single charged dye cation forms a more stable IA with HPA. Since 
monocationic form of the dye is intensely colored, this transformation from a slightly 
colored, doubly positively charged form to a singly charged is accompanied by a sharp 
color change. 

PMo

12

O

40

3-

   +       3HMG

2+

      =    (MG

+

)

3

(PMo

12

O

40

3-

) + 3H

+ 

(yellow)         (yellow, λ

max

 = 446 nm)     (green, λ

max

 = 650 nm) 

where MG – Malachite Green. 
This method was first reported by Itaya and Ui [4]. They developed a simple and 

sensitive spectrophotometric method for the determination of phosphate in serum in 
acidic medium with malachite green. The method was subsequently many times 
modified and applied to the determination of phosphate in serum, plasma and urine [5]. 

Low soluble IAs are usually formed in the reaction between HPAs and basic 

organic dyes. Various surface-active substances (SAS) were used to solubilize the 
precipitate of IA [6]. Molecules or more large particles of IAs Dye-HPA are stabilized 
by the hydrophobic interaction with SAS micelles. Thus, a stable transparent solution 
of IA is formed, for which the absorbance or intensity of luminescence can be 
measured. 

Very seldom mentioned feature of this reaction is the fact that the spectrum of IA 

is markedly distinguished from that for singly charged form of the dye. We correlate 
this fact with another factor determining the changes in the spectra by formation of IA 
Dye-HPA. It was found by us and others [5] that solutions of IA Dye-HPA can be 
stabilized without addition of surfactants or other solubilizers. Moreover, surfactants 
did not always prevent some agglutination from occurring. In the presence of many 
solubilizers, a decrease in absorbance is observed with time. 

Approaching of the dye ions naturally occurs when the precipitate of IA Dye-HPA 

is formed. This creates the conditions for the π-π interaction of aromatic systems of the 
dyes interacted. In this way, formation of dimers of more highly ordered aggregates of 
dye is promoted. Such aggregate can be destructed by solubilization with surfactants. 
Due to hydrophobic interaction, a dye molecules are efficiently solubilized in the 
microenvironment created by SAS micelles in contrast to the situation in aqueous 
solution where there is a clear tendency to aggregation of dye molecules. 

- 1415 -