composition of the extracts received.

 

To clarify how the extraction agent pH value influences the protein and 

polysaccharides release, we selected the following extraction agents: 5.0 sodium 
hydroxide solution, 5.0% hydrochloride and isotonic 0.9% solution of sodium chloride. 
The extractions were conducted at the temperature of 50 ± 2 ºС, which facilitates the 
allergenic material extraction and does not lead to the protein denaturation [6, 7, 9]. 

For conducting the allergenic material extraction usually the following ratio was 

used: 1 g of raw materials : 100 ml (more rarely 50 ml or 150 ml) of extracting agent, 
because at this ratio the raw materials: extracting agent the allergenic extract formation 
is possible, which may be used during the skin tests without additional concentration 
or dilution. For further research we chose 100 ml of the extracting agent.  

To prevent the contamination all manipulations were conducted in the laminar 

box with the maintenance of aseptic conditions. The dry C.albicans fungus biomass 
was obtained and milled in the mortar, weighted 1 gr and in parallel the protein and 
polysaccharides were extracted in 100 ml of corresponding extraction agents. One part 
was extracted with 5.0% solution of sodium hydroxide, the other – 5.0% solution of 
hydrochloride acid and the third one - with isotonic 0.9 % solution of sodium chloride 
at the temperature of 50 ± 2 ºС. The water-bath was used for the maintenance of the 
temperature 50±2 ºС.  Considering the information of references on the technologies 
of obtainment the extract from the C.albicans fungus biomass, the period of studying 
the kinetics of the protein and polysaccharides extraction does not exceed two days.  

Thus, the extraction lasted from 1 to 24 hours with further determination of 

protein and polysaccharides in the obtained extracts.  To bring the obtained allergenic 
extracts to the neutral value of рН 7,2 ± 0,2, they were neutralized by the corresponding 
chemical substances. In case of extracting using the solution of sodium hydroxide, the 
obtained extract was treated by 0.5% solution of hydrochloride acid, and in case of 
extracting with the solution of hydrochloride acid, the obtained extract was treated with 
0.5 of solution of sodium hydroxide. The preliminary filtration was conducted on the 
membrane filters with the diameter of 0.8 µm as well as the sterilization filtration on 
the membrane filters with the diameter of pores 0.22 µm. 

To define the speed of the allergenic material accumulation in extracts, the 

biochemical analysis was conducted of the composition of extracts obtained: Every 
hour the protein content was determined according to State Pharmacopoeia of Ukraine 
using the Lowry's method as well as the content of polysaccharides using the phenol-
sulfur method. 

According to the results obtained, it was determined that the greatest amount of 

protein is extracted for the shortest period of time from the biomass of C. albicans 
fungus in case of administration of 5.0% of sodium hydroxide solution. 

The determination of content of the obtained extracts of C. albicans fungus was 

- 1503 -